【前沿】高光致发光量子点(QD)标记病毒以进行_新跑狗王中王
【前沿】高光致发光量子点(QD)标记病毒以进行
更新时间:2020-01-30
 

  使用高光致发光量子点(QD)标记病毒以进行单个病毒跟踪提供了一种视觉工具,可帮助我们了解病毒感染机制。然而,有效地标记内部病毒成分而不改变病毒包膜和衣壳仍然是一个挑战,现有策略不适用于大多数病毒。在这里,我们设计了一种策略,使用聚集的规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)成像系统,以QD标记伪狂犬病病毒(PRV)的核酸。在此策略中,借助核酸酶灭活的Cas9/gRNA复合物在活细胞核中将QD与病毒核酸偶联,然后在病毒体组装过程中将其包装到PRV中。在Vero和HeLa细胞中均实时监测PRV-QD吸附,沿微管的细胞质运输以及核进入的过程,证明了该策略在病毒感染研究中的效用和效率。

  研究人员将生物素化的dCas9、PRV特异性的gRNA和链霉亲和素修饰的量子点(SA-QDs)转染进入细胞,然后再用PRV感染该细胞。在dCas9和gRNA的帮助下,量子点可以与细胞内的病毒核酸特异性结合,随着病毒的组装,即可将标记在核酸上的量子点包载进入病毒中(图1)。13607.com,标记后的量子点荧光性质和病毒活性并未受到显著影响。

  随后,研究人员利用单病毒示踪技术分别观察并分析了PRV在Vero细胞和HeLa细胞中入胞、膜融合、胞内运输、基因组入核等动态过程。在Vero细胞中,PRV通过膜融合释放病毒核衣壳进入细胞,在胞内沿着微管运输,当病毒核衣壳运输至细胞核孔后,病毒核酸释放进入细胞核。在HeLa细胞中PRV的侵染过程则截然不同,病毒首先沿着肌动蛋白微丝移动到细胞膜上,然后形成巨胞饮小体内吞进入胞内,其在胞内的运输依然是依赖于微管;随后巨胞饮小体将病毒颗粒递送到溶酶体内,PRV核衣壳在溶酶体内通过膜融合的形式释放进入细胞质中,并继续运输到细胞核孔处,最后将病毒核酸释放入核(图2)。


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